天堂中文在线www天堂在线-成熟丰满熟妇av无码区-亚洲精品国产美女久久久-妺妺跟我一起洗澡没忍住-国产在线98福利播放视频

當前位置:網站首頁新聞中心 > 檢測細胞凋亡:DNA ladder法

檢測細胞凋亡:DNA ladder法

更新時間:2012-10-10 點擊量:3005

      發生細胞凋亡時,內源性核酸酶被激活,染色體DNA鏈在核小體之間被切割,形成180~200個堿基或其整數倍的DNA的片段,將這些DNA的片段抽提出來進行電泳,可得到DNA梯狀條帶(DNA ladder)。

一、材料與試劑

凋亡細胞

蛋白酶K(500μg/ml)

8mol/L 醋酸鉀

白細胞裂解液:pH8.0,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,1% SDS。

氯仿

無水乙醇,70%乙醇;

2%瓊脂糖凝膠。

二、操作步驟

1. 收集凋亡細胞:取1~2×106 個細胞,離心后,立即用70%酒精(-20℃)固定2h;

2. 洗滌:取出酒精固定的細胞,1000r/min離心5min ,去掉上清液,PBS洗二次;

3. 裂解細胞:加400μl細胞裂解液,充分混勻再加蛋白酶K100μl,置65℃水浴消化2小時或過夜;

4. 蛋白處理:加75μl 8mol/L的醋酸鉀,4℃15min,再加750μl氯仿,充分混勻后,10000r/min離心10分鐘后,將上清移至一新的Eppendorf管中;

5. 沉淀DNA:加入750μl無水乙醇,上下輕柔顛倒混合,即可見乳白色沉淀,若不明顯時可置-20℃過夜,12000r/min離心10分鐘,去上清;

6. 洗滌DNA:加1ml70%乙醇,混勻,10000r/min 離心5min,去上清;

7. 溶解DNA:根據 DAN 沉淀的大小,加一定量的蒸餾水或TE,37℃溶解;

8. 測定DNA濃度;

9. 2%瓊脂糖凝膠電泳80V 2小時;

三、結果判斷

出現梯狀電泳條帶,zui小的條帶為180~200 bp,其他的條帶為其整倍數大小。壞死細胞則出現彌散的電泳條帶,無清晰可見的條帶。正常細胞DNA基因條帶因分子量大,遷移距離短,故停留在加樣孔附近。

主站蜘蛛池模板: 少妇特黄a片一区二区三区| 波多野结衣在线精品视频| 亚洲va久久久噜噜噜久久无码| 无码精品久久久久久人妻中字| 正在播放重口老熟女露脸| 末发育女av片一区二区| 人禽交 欧美 网站| 少妇乱人伦无码视频| 巨茎爆乳无码性色福利| 久久无码人妻国产一区二区| 国产欧美在线一区二区三| 国产 亚洲 中文在线 字幕| 午夜精品久久久久久久| 亚洲制服无码一区二区三区| 欧美亚洲综合另类色妞网| 99久久精品国产自在首页| 久久婷婷五月综合色d啪| 高潮毛片无遮挡高清视频播放| 熟女人妻高清一区二区三区| 亚洲精品久久国产片400部 | 国产精品人妻一码二码尿失禁 | 巨爆乳中文字幕巨爆区巨爆乳无码 | 欧美日韩精品一区二区三区在线| 农民人伦一区二区三区| 人人爽人人片人人片av| 欧美伊人色综合久久天天| 久久www免费人成人片| 国产蝌蚪视频一区二区三区| 久久午夜夜伦鲁鲁片免费无码影视| 欧美激情精品久久| 中文字幕亚洲情99在线| 国产精品原创巨作av| 国产美女牲交视频| 国产极品粉嫩泬免费观看| 久青草影院在线观看国产| 亚洲人成自拍网站在线观看| 久久五十路丰满熟女中出| 亚洲另类精品无码专区| 国产v综合v亚洲欧| 一二三四视频在线观看日本| 国产精品国产三级国产aⅴ下载 |