優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。而不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來不理想的結(jié)果。今天上海恒遠(yuǎn)將為大家分享：ELISA試劑盒的洗滌參數(shù)。
第yi、洗滌量
自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。ELISA板的商通常會在試劑盒的使用手冊中列出包被量。行業(yè)中通常使用的包被量是200μl。如果你的試劑盒也是這樣，那么商可能會建議使用300μl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個反應(yīng)孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
第二、洗滌循環(huán)的量
Elisa試劑盒洗滌次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會降低信號強度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過，ELISA板的商會對洗滌次數(shù)提出建議。一般而言，商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說，96孔板的每個孔能容納330至460μl。不過，有些自動化洗板機可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個量的洗滌液，比如1ml。它是如何做到的呢？其實很簡單，就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會溢出到其他孔中。
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