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ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題及原因分析

更新時(shí)間:2016-09-07 點(diǎn)擊量:4455

    上海恒遠(yuǎn)銷售部、技術(shù)部根據(jù)客戶的咨詢,將的常見問題以及原因分析整理出來以供大家參考:

(一)ELSIA實(shí)驗(yàn)中結(jié)果顏色淺、靈敏度偏低的原因

  • 試劑盒在運(yùn)輸、保存期間放置的溫度過高,時(shí)間過長,造成抗原、抗體效價(jià)下降,酶的活力降低。
  • 試劑盒已經(jīng)超出保存的有效期,抗原抗體效價(jià)下降,酶的活性降低。
  • 移液取樣不足,移液時(shí)抽吸、排放太快,移液嘴內(nèi)壁掛液太多或者內(nèi)壁不清潔。造成加樣量不足。
  • 孵育溫度偏低,或多塊反應(yīng)板重疊放置造成孔內(nèi)的實(shí)際溫度偏低,使抗原、抗體復(fù)合物形成過少。
  • 保溫時(shí)間不足,抗原、抗體反應(yīng)不*。
  • 顯色劑加入量不足。
  • 顯色液A,B比例不對。
  • 洗滌時(shí)沖擊力過大,洗滌液浸泡時(shí)間太長,洗滌次數(shù)增加,導(dǎo)致已經(jīng)形成的抗原、抗體復(fù)合物洗脫。
  • 底物反應(yīng)的溫度不夠、時(shí)間不足。

(二)ELSIA實(shí)驗(yàn)中結(jié)果出現(xiàn)白板、陽性對照不顯示的原因

  • 洗滌液配制有誤。
  • 終止液誤作為濃縮洗滌液或者酶結(jié)合物稀釋使用。
  • 漏加酶結(jié)合物,誤加酶結(jié)合物或者酶標(biāo)二抗的實(shí)驗(yàn)順序錯(cuò)誤。
  • 終止液當(dāng)作緩沖溶液使用。
  • 配制溶液中殘留了滅活酶活力的物質(zhì)。
  • 底物液未加入OPD或者TMB.
  • 運(yùn)輸、存儲(chǔ)不當(dāng)、導(dǎo)致酶活力喪失。
  • 底物液中未加入過氧化氫或放置過久過氧化氫失效。

(三)ELSIA實(shí)驗(yàn)中結(jié)果全部顯色的原因

  • 酶結(jié)合物的濃度過大。
  • 孵育溫度偏高,底物顯色時(shí)間過長。
  • 洗滌不充分,樣品有其他成分殘留或者酶結(jié)合物殘留。
  • 底物配制時(shí)間過久,底物受光照射時(shí)間較長或污染。
  • 整批樣品放置時(shí)間過長被污染或生長細(xì)菌。
  • 移液嘴重復(fù)使用時(shí),未清洗干凈或者消毒不*。
  • 配制溶液的水質(zhì)有問題。

(四)ELSIA實(shí)驗(yàn)中結(jié)果陰性、陽性對照顯色差距較小的原因

  • 稀釋不準(zhǔn)、加樣量不準(zhǔn)。
  • 加樣時(shí)各孔均被污染。
  • 底物不新鮮,配制時(shí)間過長或被污染。
  • 試劑效價(jià)下降或超過了試劑的有效使用期。
  • 配制溶液的水質(zhì)有問題。

(五)ELSIA實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性不好的原因

  • 樣品加入量多少不一,加樣時(shí)間又長有短。
  • 樣品加入后未充分混合均勻。
  • 移液加樣器加樣量不一致。
  • 酶標(biāo)儀濾光片不對。
  • 操作過程中個(gè)別反應(yīng)孔中液體外濺。
  • 不同批號(hào)試劑混用。
  • 瓶蓋交叉使用。
  • 孵育條件和保溫時(shí)間不一致。
  • 顯色時(shí)間和條件不一致
  • 邊緣效益,導(dǎo)致周邊孔(尤其是四個(gè)角)較中央孔顯色深。
  • 將酶結(jié)合物或底物溶液加在孔壁上,并有殘留。
  • 酶結(jié)合物未充分混勻就加入反應(yīng)孔中。
  • 洗滌條件不一致。
  • 多加或少加了酶標(biāo)記物、底物。
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